Polymerase Chain Reaction


Reaksi berantai polimerase (Polymerase Chain Reaction) adalah suatu models enzimatis yang melipatgandakan secara eksponential suatu sekuen nukleotida tertentu dengan cara in vitro. Empat komponen utama dalam PCR menurut Yuwono (2006) adalah:

• DNA template (cetakan), yaitu fragmen DNA yang akan dilipatgandakan; • Oligonukleotida primer, yaitu sekuen oligonukleotida pendek (15-25 Nukleotide) yang digunakan untuk mengawali sintesis rantai DNA;

• Deoksiribonukleat trifosfat (dNTP), terdiri atas dATP, dCTP, dGTP, dTTP; dan

• Enzim DNA polymerase, yaitu enzim yang digunakan untuk melakukan katalisis reaksi sintesis rantai DNA.

Pada prinsipnya tekhnologi PCR terdiri atas 3 tahap reaksi yang berbeda dalam satu siklus. Ketiga tahap tersebut adalah denaturasi, annealing, dan polimerisasi. Tahap denaturasi bertujuan untuk memutuskan iktana H asam deoksiribosanukleat (DNA) double stranded yang akan diamplikasi. Hasil yang diperoleh merupakan DNA cetakan uraian tunggal untuk penel=mpelan oligonukleotida primer dalam tahapa annealing. Pada tahapp annealing terbentuk iktana H baru antara untai tunggal DNA cetakan dengan oligonukleotida primer. Tahap Polymerisasi merupakan tahap pemanjangan rantai tunggal oligonukleotida primer berujung 3’ ke ujung 5 dengan katalis enzim DNA Polymerase. Ketiga tahap ini merupakan fungsi temperatur masing – masing tahap sebgaia berikut: Denaturasi, 95 oC, annealing 45 oC, dan polymerase 72 oC. Fungsi temperatur ini sangat bervarasi untuk setiap organisme , setiap jenis sel, setiap jenis gen, dan sebagainya tidak ada standar yang sama untuk temperatur pada tahap – tahap tersebut. Artinya temperatur di atas dapat berbeda ntuk organisme sel, dan gen yang berbeda.

Reff:

Toha, A.H.A 2001. Deoxyribo Nucleac Acid. Keanekaragaman, Ekspresi, Rekayasa dan Efek Pemanfaatanya. Penerbit Alfabeta. Bandung. 109 hlm.

Yuwono, T. 2006. Teori dan Aplikasi Polymerase Chain Reaction. Penerbit ANDA. Yogyakarta. 237 hlm.

Tinggalkan Balasan

Isikan data di bawah atau klik salah satu ikon untuk log in:

Logo WordPress.com

You are commenting using your WordPress.com account. Logout / Ubah )

Gambar Twitter

You are commenting using your Twitter account. Logout / Ubah )

Foto Facebook

You are commenting using your Facebook account. Logout / Ubah )

Foto Google+

You are commenting using your Google+ account. Logout / Ubah )

Connecting to %s